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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

大鼠白細胞介素13ELISA檢測試劑盒實驗原理

點擊次數:150 發布時間:2021-11-11
  試劑盒組成及試劑配制
 
  1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔)。
 
  2. 標準品(Standard):6瓶。
 
  3. 生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
 
  4. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
 
  5. 生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
 
  7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
 
  6. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
 
  7. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
 
  8. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)
 
ELISA試劑盒實驗
       實驗原理
 
  用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  標本的采集及保存
 
  1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
 
  2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
 
  3. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
 
  4. 樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
 
  注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
 
  ELISA試劑盒操作注意事項:
 
  1)試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
 
  2)實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
 
  3)不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
 
  4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
 
  5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
 
  6)洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
 
  7)底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
 
  8)加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
 
  9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作
 
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