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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

ELISA試劑盒實驗的注意事項

點擊次數:108 發布時間:2021-11-19
  我們在做ELISA試劑盒實驗的時候有哪些需要注意的事項呢?今天上海紀寧生物為大家羅列了幾個比較常見的事項,需要能讓大家盡量避免誤區,
 
  一、包被
 
  1、將包被抗原用包被緩沖液配制包被液,每孔取100 mL加入酶標板,蓋好蓋板膜,包被條件如下表,4℃ 16-20h包被時酶標板可以疊放,而37℃ 2h包被時酶標板之間的間距應保持一致(一般為5cm)。根據培養箱的設計調節酶標板間的間距,如培養箱從底部產熱,則應增加下層酶標板間的間距為10cm 。
 
  2、包被加樣采取吸二打一的方式,應避免加在孔壁上部,若不慎滴加在孔壁上,根據該滴溶液是否應加入孔內再做判斷,若應加入,則小心振蕩使其落入孔底,反之則用吸水紙小心吸出,并注意不可濺出,不可產生氣泡。
 
  3、包被前預吸查看槍頭是否合格,水流是否一致,不一致者應更換槍頭,包被應采用槍頭,每包被一塊板,應將槍頭套緊,并且在包被的過程中要注意查看吸液是否一致,在包被過程中若出現任何小問題,都應將此塊板做出記號,以便后期組裝入庫時淘汰。
 
  4、若采用37℃ 2h包被模式,則應給酶標板編碼,保證每塊板子的包被時間一致。
 
ELISA實驗
       二、洗板
 
  1、包被后要進行兩次洗滌,250微升/孔,洗滌完畢后,應在毛巾上拍干參與液體,并及時進行下一步封閉。
 
  2、 洗滌時要注意查看水流是否一致,在洗滌程中若出現任何小問題,都應將此塊板做出記號,以便后期組裝入庫時淘汰。
 
  三、封閉
 
  1、封閉液應提前一小時取出初步回溫,用前搖勻,每孔取180 mL加入酶標板,蓋好蓋板膜,37℃封閉 1.5h, 酶標板之間的間距應保持一致(一般為5cm)。根據培養箱的設計調節酶標板間的間距,如培養箱從底部產熱,則應增加下層酶標板間的間距為10cm 。
 
  2、封閉加樣采取吸一打一的方式,應避免加在孔壁上部,若不慎滴加在孔壁上,根據該滴溶液是否應加入孔內再做判斷,若應加入,則小心振蕩使其落入孔底,反之則用吸水紙小心吸出,殘留在槍頭內的溶液不要打出 以免產生氣泡。并注意不可濺出,不可產生氣泡
 
  3、封閉前預吸查看槍頭是否合格,水流是否一致,不一致者應更換槍頭,封閉應采用槍頭,每封閉一塊板,應將槍頭套緊,并且在包被的過程中要注意查看吸液是否一致,在封閉過程中若出現任何小問題,都應將此塊板做出記號,以便后期組裝入庫時淘汰。
 
  四烘干裝袋
 
  1、封閉完后,摔倒孔內液體,并在毛巾上拍干,接下來采取烘干或者晾干的方式徹底干燥酶標板。烘干:37 ℃倒置(不加蓋板膜或用自封袋),每5塊板烘干30 min,隨著板子數量增多時間相應延長,如100塊板,需要烘3 h,依次類推;晾干:底部鋪一層干凈的A4紙或者吸水紙,倒置板子,在頂層鋪一層蓋住避光,室溫晾18-24h。
 
  2、板子干燥后,應及時裝入自封袋,按照每塊板1袋干燥劑的量裝入,袋子外面寫好板子制備日期,放入本成品庫冷藏環境保存備用。
 
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