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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

ELISA方法如何檢測相關指標

點擊次數:64 發布時間:2021-12-09
  在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前zui常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結果可用目測或用分光光度計定量測定。
 
  操作步驟:
 
  1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100 μl /孔,4℃過夜。
 
  2.次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
 
  3.加2%BSA封閉室溫1 h,200 μl /孔。
 
ELISA方法
  4.陽性對照從10ug/ml,做倍必稀釋,待測血清從1:50做倍比稀釋,預試驗后確定稀釋倍數及陽性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做標準曲線為參數),室溫1h。
 
  5.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
 
  6.加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度) PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,100 μl /孔,室溫1h。
 
  7.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
 
  8.顯色,100 μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數,可用ABTS,OPD,TMB等。
 
  ELISA方法檢測指標我們需要在細節上多注意,這樣我們得出的指標會準確的很多。
 
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