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上海紀寧實業有限公司 >>> 技術文獻

白細胞介素-4的實驗原理及樣本處理

點擊次數:44 發布時間:2021-12-23
  白細胞介素-4是趨化因子家族的一種細胞因子。白細胞介素是由多種細胞產生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于是白細胞產生又在白細胞間發揮作用,所以由此得名,現仍一直沿用。由白細胞產生又在白細胞間起調節作用的細胞因子?,F在是指一類分子結構和生物學功能已基本明確,具有重要調節作用而統一命名的細胞因子,它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協調,相互作用,共同完成造血和免疫調節功能。白細胞介素在傳遞信息,激活與調節免疫細胞,介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。
 
  現將工作原理公布如下: 采用雙抗體夾心法測定大鼠白細胞介素 4(IL-4)水平。用純化的大鼠白細胞介素 4(IL-4)抗體包被微孔板,制成固相載體,實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品,并加入 HRP 標記的白細胞介素 4(IL-4)抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 IL-4 含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值),根據標準曲線,計算測試樣品中白細胞介素 4(IL-4)濃度。
 
白細胞介素
       白細胞介素-4樣品收集、處理及保存:
 
  1、細胞培養上清:適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
 
  2、細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
 
  3、 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
 
  4、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,1000×g離心15分鐘,收集上清。
 
  5、體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
 
  6、組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。
 
  7、樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 
  8、保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
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